Ецио се завръща и се бори срещу могъщия Орден на тамплиерите. Сега, като легендарния Майстор Асасин, той трябва да пътува до Рим, центърът на властта, алчността и корупцията, за да удари в сърцето на врага. Ецио ще води цялото Братство, което ще се събере около него, и само като работят заедно, Асасините могат да победят своите смъртоносни врагове.

Assassin's Creed Brotherhood също предлага напълно иновативен мултиплейър елемент, където играчите ще могат да помагат на тамплиерите, използвайки Абстерго, за да се обучат в изкуството на убийството, с цел да елиминират Асасините веднъж завинаги. Играчите ще имат възможността да изберат от редица уникални герои - всеки от които има свои оръжия и отличителни техники за убийство - и да комбинират уменията си срещу други играчи от цял свят в различни игрови режими.